人类辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology, ART)是运用医学技术和方法对配子，合子，胚胎进行人工操作,以达到受孕目的的技术。其中主体为体外受精－胚胎移植（IVF-ET）及其衍生技术。1988年中国大陆首例试管婴儿在北京大学第三医院诞生以来，我国ART技术的不断深入开展与普及，目前每年应用辅助生育技术治疗的收治容量已达20000～30000周期，由ART带来的技术本身以及社会，伦理，道德，法律等诸多方面的问题也日益突出，其应用的安全性也值得探讨。2001年2月卫生部以14号和15号部长令颁布了《人类辅助生殖技术管理办法》和《人类精子库管理办法》，同年5月以卫科教发（2001）148号发布了《人类辅助生殖技术规范》、《人类精子库基本标准》《人类精子库技术规范》和《实施人类辅助生殖技术的伦理原则》，2003年6月以卫科教发（2003）176号颁布修订的《人类辅助生殖技术规范》、《人类精子库基本标准和技术规范》、《人类辅助生殖技术和人类精子库伦理原则》。这些文件的颁布对促进和规范我国人类辅助生殖技术和精子库技术的发展和应用、保护人民群众的健康权益起了积极的推动作用。
 
一、体外受精-胚胎移植及其衍生技术规范
（一）体外受精－胚胎移植技术临床常规
1适应证：
（1）女方各种因素导致的配子运输障碍
（2）排卵障碍
（3）子宫内膜异位症
（4）男性少、弱精症
（5）原因不明的不育
（6）免疫性不育
2禁忌证：
（1）男女任何一方患有严重的精神疾患、泌尿生殖系统急性感染、性传播疾病；
（2）患有《母婴保健法》规定的不宜生育的、目前无法进行胚胎植入前遗传学诊断的遗传性疾病；
（3）任何一方具有吸毒等严重不良嗜好；
（4）任何一方接触致畸量的射线、毒物、药品并处于作用期；
（5）女方子宫不具备妊娠功能或严重躯体疾病不能妊娠。
3术前准备
（1）询问女方病史，全身检查及妇科盆腔检查；
（2）严格掌握适应证及禁忌证；输卵管因素不育者需有输卵管检查记录；
（3）月经周期第2~3天测基础女性性激素，盆腔B超检查，阴道分泌物检查；必要时行子宫内膜活检、宫颈细胞学检查；
（4）男方病史及体格检查，精液常规化验；
（5）夫妇双方乙肝病毒学检查、丙肝抗体、艾滋病抗体、梅毒血清学、肝功能、血型，女方TORCH、血沉、血常规、尿常规、凝血功能、心电图等；必要时染色体检查；
（6）介绍IVF-ET的大致经过、费用、并发症和可能的危险性等，并签署相关知情同意书、多胎妊娠减胎术同意书；
（7）交验结婚证、身份证、计划生育服务证明，病例中保留复印件。
4控制超排卵方案
（1）长方案：拟超排卵的前一个周期黄体中期使用GnRH-a，月经来潮第2-3天开始进行促性腺激素（Gn）促排卵。2个以上卵泡直径达18mm时，结合血清E2、LH、P水平决定hCG 使用时间和用量（4000~10,000IU）以诱导卵母细胞最后成熟。注射HCG后34～38小时取卵。
（2）短方案：于月经第1-2天开始使用GnRH-a,  余同长方案。
（3）超短方案：仅于月经第2、3、4天使用GnRH-a, Gn用药同上。
（4）GnRH-拮抗剂方案：单剂量或多剂量方案。
5阴道B超引导下卵泡穿刺取卵术
（1）取卵术前一天可用生理盐水冲洗阴道1-2次；
（2）术前排空膀胱，可选择静脉麻醉或仅予镇静剂；
（3）常规清洁外阴，窥器暴露阴道、宫颈，用生理盐水棉球擦洗清洁阴道，干棉球蘸干盐水，取出窥器，阴道内注入培养液约5ml；
（4）采用16G或17G取卵专用针，阴道B超引导下，通过针导架沿引导线方向，选择距卵泡最近距离进针，注意避开血管、膀胱、肠管等；压力为120mmHg（1mmHg=0.133kPa）,立刻送到实验室，注意保温；
（5）取卵结束时超声观察盆腔内液体量；了解阴道内出血情况，并作相应处理；
（6）术后观察1-2小时，观察患者主诉、血压脉搏等生命体征及阴道出血情况和排尿情况；
（7）术中及术后应用抗生素预防感染，必要时应用止血药。
6精液采集：
（1）核对确认患者夫妇姓名；取精日或前一日淋浴，彻底清洁外阴部。
（2）取精过程应在专用取精室完成，或在经专业人员允许的清洁环境中进行；
（3）取精液前清洗双手和外阴；用无菌纱布彻底擦干双手及外阴部水迹；将一次性取精杯盖子松开备用；
（4）手淫法取精，注意尽量避免手、龟头和阴茎等接触杯内壁；
（5）取精时避免异物落入精液杯内；一旦发生以上情况通知有关人员妥善解决；
7黄体期支持
根据个体情况选择个体化方案支持黄体功能。可应用：
（1）HCG+孕酮
（2）单纯孕酮
（3）孕酮
8胚胎移植
（1）取卵后48~72小时行分裂球期胚胎移植或取卵后第5-6天行囊胚移植；每周期移植胚胎总数不得超过3个，其中35岁以下妇女第一次助孕周期移植胚胎数不得超过2个；
（2）常规冲洗外阴，窥器暴露宫颈，用培养液擦拭宫颈和宫颈管；
（3）用带外套管的胚胎移植管移植时，先将移植外导管插入达宫颈内口以上水平，用内导管吸取胚胎，通过外导管插入至超过外导管1.5-2.0cm处，移植内管顶端应位于宫腔中部，将胚胎推入宫腔并停留片刻后取出移植管，送回胚胎实验室；
（4）在实体显微镜下冲洗并检查移植内管，确定有无胚胎残留或遗漏；
（5）可行B超引导下胚胎移植；
（6）移植后卧床休息半小时后离院。
8妊娠管理
（1）移植术后14天查尿hCG及血hCG；如阳性，一周后再复查血hCG，至移植后30天B超检查。
（2）生化妊娠不计算入临床妊娠率中。血hCG升高且B超见胎囊者或临床见绒毛组织并经组织学检查证实者诊断为临床妊娠；
（3）双胎妊娠建议行减胎术，三胎妊娠必须行多胎妊娠减胎术；
（4）妊娠后根据患者情况继续应用黄体支持，孕6~12周黄体支持逐渐减量。
（二）单精子卵母细胞内注射临床常规
1适应证
（1）严重少、弱、畸精子症
（2）梗阻性无精症
（3）生精障碍但睾丸活检有精子者，排除遗传缺陷疾病所致
（4）精子顶体异常
（5）相对适应症如：曾经行体外受精精卵不结合或受精率低于30％；需行植入前胚胎遗传学诊断；体外培养成熟的卵子；可疑为免疫性不孕；相对少弱精子症；
2禁忌症  同常规IVF-ET
3术前准备
常规IVF-ET所需准备，男方可根据情况增加下列检查内容：
（1）染色体核型分析
（2）性激素检查
（3）无精症患者需行附睾穿刺或睾丸活检术见成熟精子
4睾丸精子和附睾精子的采集
（1）经皮附睾精子抽吸术
（2）经皮抽吸睾丸组织术
（3）小切口睾丸活检术
5其他女方处理均同常规IVF-ET
（三）体外受精-胚胎移植及衍生技术实验室操作常规
1精液处理及精子准备常规
（1）核对患者夫妇姓名
（2）精液常规检查
①正常精液量：≥2.0ml
②液化：一般30分钟液化。如果室温下60min内未发生完全液化，应当记录。
③外观：正常呈均质、灰乳白色外观
来源：(http://blog.sina.com.cn/s/blog_4aae6b7a01009xkr.html) - 中国人类辅助生育治疗_wzzblog_新浪博客 
④粘稠度
⑤pH值：正常范围7.2-8.0。
（3）精液的显微镜观察
①活动力等级：分四级
a.快速前进活动力
b.慢速或缓慢的前进活动力
c.无前向活动力
d.静止不动
·正常活动力：60min内，向前运动（a＋b）≥50％或快速运动（a）≥25％（WHO 2001）
·如果精子数目少(1-2个精子/LPF),观察几个光镜视野，注明能否看到活动精子，记录运动/不动的精子数量。
·如果60个低倍视野内仍未见到精子，离心全部液体，确定在沉渣中有无精子。
②精子计数
·精子浓度用血细胞计数的方法进行测定
·取50µl液化的精液加到950µl精子计数稀释液内，进行1：20稀释，充分混匀
·如果精子数≤20X106/ml，则1：10稀释
·如果精子数≥100 X106/ml，则1：50稀释
·正常精子浓度：≥20×106个精子/ml
③精子活力
如果不运动的精子的百分比≥80％，活精子的比例应当通过活细胞染色的方法进行判定（计数100个精子，活精子不着色，死精子着色）。
2受精用精液准备
（1）丈夫在女方取卵的同时提供精液；
（2）在超净工作台内进行精液操作；
（3）精液液化后，观察精液外观，并取一滴在显微镜下检查精子密度、形态和活力，记录于病历上；
（4）精液样本的处理：
①不同浓度的梯度分离液分离制备精子
②离心上游法
③少精样本的处理
¨   精液液化后，将全部精液与5ml培养液充分混合，置入15ml离心管内，300g，离心10min；
¨   弃上层悬液，吸出沉淀，加入1ml培养液内，置入冻存管内；
¨   500g，离心5min；
¨   弃上清，重新用1ml培养液悬浮沉淀，500g，离心5min；
¨   弃上清，小心地向冻存管内加入100ul培养液；
¨   旋开冻存管帽，置入CO2培养箱，37℃培养，备用；
¨   受精之前，取上层悬液一滴镜检；
¨   必要时可重新离心，弃上清后，取沉淀进行ICSI。
3常规体外受精技术常规
（1）准备：受精液、胚胎培养液、冲洗液、精子处理液等；根据卵泡数量准备培养皿；
（2）检卵：显微镜下确认的卵冠丘复合体经培养液洗涤后，移到卵细胞培养皿中，置入370C、 5％二氧化碳的培养箱内培养；
（3）精子准备（前述）；
（4）授精：在取卵4h－6h后进行；授精浓度：每个卵冠丘复合体约（1－2）X105条前向运动精子；
（5）受精检查：受精后16－20h检查，机械法去除卵母细胞周围的颗粒细胞，将受精卵移至胚胎培养液微滴中，显微镜下观察，检查每个受精卵的原核数量和极体，记录结果；
（6）卵裂检查
·受精卵继续培养48h，记录胚胎发育情况，对每个胚胎进行评分；
·剩余的有发育潜能的胚胎冷冻保存；
·每位患者在胚胎移植前签署胚胎、未受精卵及精子去向知情同意书；
（7）胚胎移植
·将1ml注射器接至移植管上，用培养液冲洗移植管。然后分别在移植管内吸入培养液-气体-含有胚胎的培养液-气体-培养液，注意液体量大约为10ul-20ul；
·胚胎移植后用培养液冲洗移植管和外套管。在解剖镜下检查冲洗液，确保所有胚胎移植进宫腔；
·记录进入宫腔情况、移植胚胎数目、术者和移植日期；
4单精子卵母细胞注射技术常规
（取卵、检卵及受精前预培养同常规体外受精）
（1）各种操作液的准备
（2）制作显微操作皿，准备显微注射后培养皿，安装显微操作针
（3）精液处理
①少弱精症精子的准备: 同常规IVF精子制备,但上游时只加0.2—0.5ml培养液[2]；
②附睾抽吸精子制备：
附睾抽吸所得附睾液置于盛有培养液的培养皿中，将此培养皿中液体全部转入离心管,300g离心10分钟,弃上清,加入0.1—0.2ml培养液,置37℃,5％CO2培养箱待用；
③睾丸活检组织精子制备:睾丸活检组织(针刺抽吸或小切口活检组织)置于盛有培养液的培养皿中,用针头将组织撕碎，离心，在沉淀上加0.1ml培养液；
（4）卵子准备：
①取卵后2小时，卵冠丘复合体在透明脂酸酶内消化30秒，转入培养液内机械法脱去卵丘，培养液滴内反复洗数遍；
②检查卵子成熟度；
③MII卵细胞转移入培养液滴内，5％CO2，37℃培养待ICSI。
（5）ICSI步骤
在PVP滴中加入适量精子；制动精子后将单个精子吸入针内；持卵针将MII卵母细胞固定（第一极体放在接近12点或6点钟处），注射针刺入卵母细胞内后回吸证实刺破卵质膜后将精子缓慢推进胞质中，移入培养滴内置培养箱中培养。
（6）受精检查（注射后12—14小时）、卵裂检查、胚胎发育观察及移植同常规IVF。
5胚胎程序冷冻和解冻技术常规
（1）冷冻胚胎操作步骤：转移胚胎至冷冻保护液中经过预平衡、脱水等处理，装入冷冻管内，用塞子塞紧冷冻管，管塞上注明胚胎拥有者的姓名、胚胎数量及冷冻日期；放入冷冻仪中按预定程序冷冻，麦管移入液氮罐中保存并做相应的登记定位；
（2）解冻胚胎步骤
①准备解冻液
②准备解冻后胚胎培养皿
③按照冷冻登记找到胚胎在液氮罐中的位置，取出冷冻管放入装有液氮的保温桶内；
④确认标本无误，取出冷冻麦管室温（20-22℃）40秒，麦管置于30℃水浴中1分钟取出蘸净水迹，无菌剪剪掉一端，麦管开口向下,剪掉另一端, 使管内冷冻液及胚胎流入四孔皿中部；
⑤转移胚胎于解冻液中复苏后转入准备好的培养皿内，置于37℃、5％CO2培养箱内培养1-2小时后移植，或行囊胚培养后移植，完成解冻记录；
6辅助孵化技术常规
（1）适应证
①胚胎透明带偏厚
②高龄患者（37岁或37岁以上）
③数次移植未孕（第3次移植或更多）
④解冻胚胎
（2）操作方法
①机械法
②酸法
③ 激光法
7囊胚培养技术
（1）囊胚培养的不利因素
a．年龄超过35岁；
b．受精率明显低于平均水平；
c．优质胚胎比例明显低于平均水平；
d．既往治疗周期中囊胚获得率过低。
（2）囊胚培养的条件选择：取卵后72小时观察
优质胚胎≥6个，或8细胞I，II级的胚胎≥4个，且不存在囊胚培养的不利因素，经患者知情同意后可将胚胎进行囊胚培养。
8胚胎植入前遗传学诊断技术
植入前遗传学诊断(PGD)是在胚胎着床之前对配子或胚胎的遗传物质进行分析,检测配子或胚胎是否有遗传物质异常的一种早期产前诊断方法；通过PGD,选择检测项目正常的胚胎进行移植。