摘要 目的 探讨精子DNA碎片率（DFI）对IVF-ET结局的影响。方法 回顾性研究2018年1月至2018年12月期间于本院行IVF助孕的不孕夫妇49对，采用精子DNA碎片染色试剂盒（瑞-吉染色）对精子行DNA碎片化率检测，根据检测结果将患者分为：正常组（DFI<10%），异常组（DFI≥10%），用SPSS17.0软件进行数据处理，统计分析两组IVF受精率、可用胚胎率、优质胚胎率、临床妊娠率，行两组间比较。 结果 正常组与异常组间比较IVF受精率、可用胚胎率、优质胚胎率、临床妊娠率均无统计学差异性。 结论 精子DNA碎片化程度对IVF-ET结局无明显影响。

关键词  DFI； DNA碎片； IVF-ET


Effects of sperm DNA fragmentation on outcomes of IVF-ET


Abstract：objective：To investigate the effects of sperm DNA fragmentation index on outcomes of IVF-ET. Methods: A retrospective study of 49 infertile couples who underwent IVF in our hospital from May 2015 to January 2014. Sperm DNA fragmentation assay kit (wright-Giemsa stainmethod)was used to detect sperm DNA fragmentation. According to the test results,the patients were divided into normal group（DFI<10%），exception  group（DFI≥10%），the datas were processed by SPSS17.0 and compared between the two groups. Result: IVF fertilization rate、available embryo rate、high quality embryo rate and clinical pregnancy had no significant differences between the normal group and abnormal group.Conclusion: Sperm DNA fragmentation had no significant effect on IVF outcome.

Key words:  DFI;  DNA fragmentation; In vitro fertilization


近年来不育夫妇中，有50%的不育原因是由男性因素引起的。在行IVF助孕的不育夫妇中，由于精子质量而导致的受精失败逐年上升，如何准确评估精子质量逐渐成为近年来研究的热点。在男性睾丸和附睾组织中，精子由精原细胞经历4个生精周期（人类每个生精周期为16天），经过有丝分裂增值、两次减数分裂，同时伴随遗传物质染色体的解链、复制、浓缩，以及形态学的变化最终形成具有受精能力的单倍体配子。此过程中如氧自由基、化学品、毒物、辐射等因素均会对精子的DNA产生损伤。目前，除常规精液分析和精子形态评估男性生育力外，对于精子DNA碎片化程度评估精子质量的研究日趋升温。本研究旨在研究精子DFI对体外受精的受精、卵裂，优质胚胎形成，以及对临床妊娠的影响。


资料与方法


研究对象：回顾性分析2018年1月至2018年12月就诊于我院生殖中心行IVF-ET助孕(除外ICSI助孕)的患者49例，最大年龄54岁，最小年龄22岁，平均（29.14±6.02）岁。


目的：探讨精子DNA碎片率对IVF-ET结局的影响。


方法：

1.精子的获取：患者禁欲2-7天，手淫法获取新鲜精液，行精子DFI检测。试剂为安徽安科生物工程（集团）股份有限公司生产，对500条精子进行染色质扩散试验，分别统计大晕环精子、中晕环精子、小晕环精子、无晕环精子以及退化精子的个数，DFI=（小晕环精子+无晕环精子+退化的精子）/500×100%。

2.卵泡的获取：超促排卵方案，OPU日获取新鲜卵泡。

3.根据精子DFI值分为：正常组（DFI<10%），异常组（dfi≥10%）。< p="">

4.观察指标：OPU当日行常规IVF受精观察卵裂，见2个原核（PN）和第2极体（Pb2）为正常受精，对胚胎进行评级分为：I、II、III、IV级，I、II、III级为可用胚胎，I、II级为优质胚胎。IVF受精率=（受精胚胎数/M2卵数）×100%；可用胚胎率=（I、II、III级胚胎/受精胚胎数）×100%；优质胚胎率=（I、II级胚胎/受精胚胎数）×100%；临床妊娠为血hCG、彩超确定宫内妊娠。

5.统计分析：

采用SPSS17.0进行数据处理，计量资料用表示；组间比较采用t检验，P<0.05认为差异性有统计学意义；临床妊娠率数据分析，计数资料采用四格表检验。< p="">


结   果


正常组平均年龄（27.18±4.16）岁，异常组平均年龄（30.19±6.64）岁，两组年龄比较P=0.07无统计学差异性（P>0.05）。

两组间比较：受精率、可用胚胎率、优质胚胎率、临床妊娠率均无统计学差异性（P>0.05）。

注：两组间比较，P>0.05无统计学差异性。


讨  论


精子DNA碎片化是否影响受精率、胚胎发育、临床妊娠率仍有争议。有证据表明精子DNA的损伤与男性不育及自然妊娠率的减低有密切关系[1]。Bungun[2]的研究显示，当精子DFI为20%-30%时，自然受孕的几率就开始降低；当DFI为大于30%时，自然受孕的几率几乎为零。然而，精子DNA碎片对辅助生殖中的受精率、胚胎质量及发育潜能的问题成为讨论的热点。


国内部分学者研究[3]，精子DFI<25%,与精子dfi≥25%的受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优胚率以及临床妊娠率均无统计学差异性。亦有些学者[4]统计显示，精子dna碎片升高不仅会导致精子前向活力、畸形率增高，还可导致ivf受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优胚率下降，但对临床妊娠率无明显影响。精子dna碎片化对art的影响尚存争议。< p="">


本研究的统计结果，正常组和异常组间比较：受精率、可用胚胎率、优质胚胎率、临床妊娠率均无统计学差异性。本研究的统计结果可能受以下因素影响：(1)因样本量小或样本不具有代表性，可能导致统计结果的偏差。(2)获取卵泡因素：因女方不孕原因（如盆腔因素，排卵因素等）以及超促排卵方案（长方案、短方案等）存在差异性，导致OPU日获取的卵泡有差异，可能导致IVF受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优胚率的差异性；纳入标准中的女方因子宫容受性、盆腔因素、内分泌因素以及子宫内膜等因素的差异性，可能导致本身对临床妊娠率有影响。(3)行体外受精时，选取精子方法可能导致最终用于体外受精的精子DNA碎片化率与原精液不同。挑选精子的方法对精子DNA碎片产生的影响未确定。（4）根据精子DFI严重程度分组，分组数值的不同以及未排除男方用药治疗后的效果评估，可能影响最终的统计结果。综上分析，研究精子DNA碎片化程度对IVF-ET结局的影响，仍需设计更科学、更严谨的研究方法。


参考文献

1.Bungun M. Role of Sperm DNA Integrity in Fertility [M].Embryoiogy-Updates and Highlights on Classic Topics.Intech,2012,March:23-40. 

2.Bungum M,Humaidan P ,Axmon A,et al. Sperm DNA intergrity assessment in prediction of assisted reproduction technology outcome[J].Human Reproduction,2007,22(1):174-179

3.秦文松，刘英，秦辉灵，等.精子DNA完整性与IVF/ICSI助孕结果的影响[J].中国计划生育杂志，2015,15(1):25-28

4.张帅.精子DNA碎片对IVF-ET结局的影响[D].天津：天津医科大学研究生院，2013:1-18.