【摘要】　目的　探讨血小板活化、黏附、聚集功能变化在妊娠期高血压疾病(hypertensive disor-der complicating pregnancy, HDCP)的发生发展中的作用。　方法　设立正常非孕组(40例)、正常妊娠组(40例)和HDCP组(共60例,妊娠期高血压、轻度子前期和重度子前期分别为25、20和15例),以流式细胞数测定血小板总数,以放射免疫法测定血小板颗粒膜旦白(GMP-140)、ELISA法测定血栓烷B2(TXB2)、β-血小板球旦白(β-TG)、测量血小板黏附率(PAdT)和血小板聚集率(PagT)。结果　(1)正常非孕组、正常妊娠组、HDCP组血小板数分别为(206±48)×109/L、(204±52)×109/L和(168±51)×109/L,HDCP组显著低于其它两组(P<0·05);(2)正常妊娠组与正常非孕组GMP-140分别为(12·2±3·8)μg/L、(7·9±2·8)μg/L,TXB2分别为(80·0±39·6) ng/L、(73·6±40·8) ng/L,β-TG分别为(18·5±9·8)μg/L、(16·3±9·5)μg/L,正常妊娠组各指标均较正常非孕组明显升高(P<0·05);而HDCP组GMP-140、TXB2和β-TG分别为(25·1±3·8)μg/L、(107·6±32·8) ng/L和(23·9±9·2)μg/L,较正常非孕组和正常妊娠组明显升高(P<0·01);(3)正常非孕组、正常妊娠组、HDCP组血小板黏附率(PAdT)分别为(18±9)％、(20±8)％和(30±10)％,血小板聚集率(PagT)分别为(28±10)％、(29±10)％和(40±12)％,HDCP组高于正常非孕组和正常妊娠组(P<0·01),并随病情加重而呈增高趋势。　结论　血小板的活化、黏附、聚集功能的改变可能参与了HDCP的发生、发展过程。

【关键词】　血小板活化;血小板聚集;妊娠并发症,心血管;高血压

　　妊娠期高血压疾病(hypertensive disorder　complicating pregnancy,HDCP)的病理生理过程包括了血管内皮损伤、凝血、纤溶系统激活以及血小板功能状态的改变[1]。本研究旨在通过HDCP患者血小板活化、黏附、聚集等功能变化,探讨血小板功能状态改变在HDCP的发生发展中的作用。

资料和方法

一、研究对象与分组
　　选择2004年1月至2005年6月在我院产科住院的HDCP患者60例,诊断标准参见文献[2],其中
妊娠期高血压25例,轻度子前期20例,重度子前期15例。平均年龄(28·6±6·3)岁(19·2~39·8岁);,平均孕周(36·1±2·9)周(33·2~40·6周),无其它合并症。正常妊娠组40例,平均年龄(25·8±6·7)岁(21·2~40·2岁);平均孕周(34·2±4·2)周(34·5~40·1周)。正常非孕组妇女40例,为体检合格的健康献血者,年龄22·2~37·2岁,平均(26·5±5·8)岁。三组孕妇的年龄、孕周均无统计学差异(P> 0·05),具有可比性。以上三组近期均未服用影响血小板功能的药物,均无出血性疾病家族史。

二、研究方法
1.标本采集和处理:取空腹肘静脉血8 ml(正常非孕组随机抽取,正常妊娠组和HDCP组于临产前抽取),0·109 mol/L枸橼酸钠抗凝,测定血小板颗粒膜蛋白(GMP-140)用2％的1,2二氨基四乙酸二钾盐抗凝。1000 r/min离心10 min,血浆分离后置-20℃保存待测。

2.酶联免疫吸附测定方法及试剂:采用SLTSPECTRA酸标仪以酶联免疫吸附(ELISA)法测定血小板颗粒膜蛋白(GMP-140)、血栓烷B2(TXB2)、β血小板球蛋白(β-TG),试剂为上海太阳生物技术公司生产的试剂盒,操作步骤按照使用说明书严格执行。

3.血小板数量的测定:取血浆标本2 ml,以磷酸缓冲液(PBS)洗涤3次(1000 r/min,5 min),制成血小板悬液,调整其浓度为300×109/L;用洗涤固定的血小板10μl,加多克隆抗体(McAb)10μl,PBS洗涤2次,离心,弃上清。流式细胞仪检测:采用FACSCan流式细胞仪进行检测,样品测试前,用标准荧光微球调整荧光,检测CV值在2％以下;收集10 000个血小板,阳性率由异硫氰酸盐荧光数决定,荧光强度对数放大,光散射及荧光数据存入软盘,测试完后在计算机对数据自动分析。

4.血小板黏附率(PAdT)的检测:取血浆标本1 ml加入血小板黏附仪中检测,计算公式为:PAdt=(黏附前血小板数-黏附后血小板数)/黏附前血小板数×100％。

5.血小板聚集率(PagT)的检测:取血浆标本0·5 ml置于血小板聚集仪(日本株式会社PEA3200型)比浊管内,由微机处理并报告5 min血小板最大聚集率。

三、统计学方法
应用SPSS 7·5软件包,数据采用-x±s表示,各组间均数比较用t检验。

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结果

一、各组血小板计数和血小板活化、释放指标的测定结果HDCP组血小板计数明显低于正常非孕组和正常妊娠组(P<0·05)。HDCP组的GMP-140、TXB2、β-TG水平较正常妊娠组和正常非孕组显著增高(P<0·01),且随病情加重而越明显,正常妊娠组较正常非孕组增高(P<0·05)。但以上各项指标在妊娠期高血压组与正常妊娠组之间无显著差异(P>0·05),见表1。

二、各组的血小板黏附率(PAdT)和血小板聚集率(PagT)测定结果。妊娠期高血压疾病组中的轻度和重度子前期组与正常非孕组、正常妊娠组比较,PAdT和PagT均显著增高(P<0·05),且随病情加重呈递增趋势;妊娠期高血压组与正常非孕组和正常妊娠组比较差异无显著性(P>0·05),见表1。

讨论
　　近年来的研究表明,妊娠期高血压疾病的病理生理过程包括血管内皮损伤、凝血系统、纤溶系统的激活以及血小板功能的改变。Konijenebera等[3]研究认为,血小板活化、黏附和聚集过程加剧,是妊娠期高血压疾病病理生理变化的一个重要方面。本研究以正常非孕妇女和正常妊娠妇女为对照,观察了妊娠期高血压疾病患者血小板功能状态的相关变化,探讨其变化的原因,为其血液高凝状态的防治提供理论依据。

　　血小板功能状态的变化是一个复杂的问题,一方面,妊娠期高血压疾病时血管内皮细胞损伤激活
了血小板,另一方面,微血管系统变形能力下降,血小板通过血管时容易破碎,导致血小板颗粒内容物
释放。采用McAb经流式细胞术检测表达有活化分子标志物的血小板数量,可直接反映体内血小板
活化程度和功能状态。血小板计数是反映血小板生成与衰亡的指标,当外周血中血小板被大量激活致
消耗增多、破坏加重时,血小板计数可减少,所以观察血小板数量的变化对了解血小板功能状态有一定
的临床意义,但敏感性不高,只有在血小板明显消耗时才有显著改变[4]。本研究结果显示,妊娠期高血
压疾病孕妇血小板计数明显下降,说明作为血小板活化后的结果,血小板被大量消耗。

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　　近年来的研究发现,测定血小板膜糖旦白能较好地反映血小板的活化程度,其中又以GMP-140和β-TG较为理想。GMP-140位于正常血小板α颗粒膜上,只有当血小板活化、释放颗粒内容物时GMP-140才整合表达在活化血小板表面,同时有部分进入血浆,成为血小板活化的特异标志[5]。β-TG有活化分子标志物表达的作用,它是一种相对分子量为140 000的膜糖蛋白,静止的血小板表面β-TG含量极微,当血小板受刺激激活时,β-TG随α颗粒内容物的释放与质膜融合,能持久表达于活化的血小板表
面[6,7],因而,可直接、特异地反映体内血小板的活化、释放程度和功能状态,对探讨与血小板活化相关的疾病有重要意义。血小板活化是导致血小板功能亢进的重要原因,也是血栓形成的重要条件。本研究显示,正常晚孕妇女血浆血小板计数、GMP-140、β-TG较正常非孕妇女明显升高,说明其血小板活化,激活凝血系统,以保证分娩时出血量少;妊娠期高血压疾病(包括轻度子前期、重度子前期)患者血浆GMP-140、β-TG含量显著升高,且随病情的进展其含量显著升高,提示血小板过度激活,凝血活性过强,这一现象与文献报道一致[8]。

　　血栓素A2(TXA2)是花生四烯酸的主要代谢产物,它可直接引起血小板聚集,具有强烈的血小板聚集和血管收缩作用。TXA2本身很不稳定,在体液中的半衰期仅为30~60 s,然后迅速变成稳定的代谢产物TXB2,故常用TXB2反映TXA2的水平。TXB2属黏附分子选择素家族,具有介导活化血小板或内皮细胞与中性粒细胞黏附、聚集、形成血栓的作用。血小板黏附有血管性血友病因子(vWF)与,vWF正是通过TXB2的桥梁作用而黏附于血管胶原纤维与血小板膜上的受体II/IIIa而完成黏附[9]。因此,认为妊娠期高血压疾病患者血管内皮损伤,胶原暴露,内皮细胞合成vWF增加,从而引起血小板黏附、聚集率增高。本研究结果证实,妊娠期高血压疾病患者血小板PAdT、PagT较对照组显著增高(P<0·01),说明妊娠期高血压疾病患者血小板黏附、聚集功能增强。据此,可认为妊娠期高血压疾病患者是否可以通过某些有效的途径或方法阻断血小板的活化、黏附、聚集,从而使其临床症状得以改善。

　　20世纪90年代末期有关阿斯匹林、硫酸镁治疗HDCP的研究认为:血小板激活后聚集成团,形
成微血栓,阻塞血管并释放多种缩血管物质。阻碍血管的收缩、微循环血栓的形成,导致包括子宫及胎
盘等重要脏器在内的循环功能紊乱,引起组织缺氧、缺血,使血管内皮细胞受损加剧,血小板不断聚集、破坏,形成疾病的恶性循环。据此,人们设想通过某些可行的途径或药物阻断或抑制血小板的黏附、聚集、活化,或许是改善HDCP患者临床症状的有效途径[10],因此认为小剂量的阿斯匹林有抗血小板聚积的作用,能预防妊娠期高血压疾病的发生且临床应用没有增加母儿并发症,导致预防性使用阿司匹林来预防妊娠期高血压疾病变得很普遍。但目前国外有研究认为阿斯匹林不能降低孕妇妊娠期高血压的发生率,反而会增加胎盘早剥的发生率[11]。

　　综上所述,血小板的活化、黏附、聚集功能的改变可能参与了妊娠期高血压疾病的发生发展过程,
因此,我们认为对妊娠期发生了高血压疾病的患者,预防性使用抗血小板药物是必要的。

参考文献：略