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2020年10月17-21日（北美东部夏令时），由于疫情的影响，2020年美国生殖医学会（ASRM）学术年会在线上召开。妇产科在线(www.cogonline.com)是中国最具影响力的妇产领域专业学术媒体与服务平台之一，益普生(IPSEN)是致力于学术交流的跨国医药企业！我们已连续4年携手为广大妇产科、生殖医学领域同道带来最新最前沿的ASRM会议资讯，并邀请业内知名专家解读会中精彩报告和摘要。今年的线上会议期间，我们将再度携手让广大同道一览国际前沿的一线观点，将会议学术精粹尽收眼底！

黄国宁

中华医学会生殖医学分会主任委员、重庆市妇幼保健院黄国宁教授携其团队在本次会议中不但做了分会场的论文报告，而且有五篇研究论文被大会收录，可谓硕果累累。我们邀请到黄教授与大家分享这些研究设计和成果。


论文报告


O-95 玻璃化冻融卵子与新鲜卵子的临床预后对比：一项倾向性评分匹配研究

作者：Jingwei Yang、Xiaodong Zhang、Guoning Huang

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背景

卵子玻璃化冷冻是一项安全且有效的技术。曾有研究报道卵子玻璃化冻融之后，卵子质量以及随后胚胎发育不受影响；且玻璃化冻融卵子和新鲜卵子的着床率和妊娠率没有差异。


因此，对于希望保留生殖潜能的女性而言，推荐卵子玻璃化冻融技术，同时也有利于具有营利性质的卵子库的建立。然而，动物实验显示卵子玻璃化冻融技术对卵子质量和胚胎发育都造成了不利影响。卵子玻璃化冷冻技术影响胚胎形态动力学，例如染色体分离异常，细胞器损伤或渗透压异常，这些被证实是由于减数分裂纺锤体和细胞骨架的异常引起。然而，玻璃化冷冻技术可致人类卵子损伤的证据仍然有限。


目的

该项研究的目的在于比较玻璃化冻融卵子与新鲜卵子临床移植后胚胎发育的预后差异，为卵子玻璃化冻融的方案选择提供证据。


材料与方法

研究人群

我们回顾分析了2016年1月至2019年1月之间，重庆市妇幼保健院生殖医学中心所通过胞浆内单精子注射（ICSI）受精的1293例新鲜卵子和67例玻璃化冻融卵子，共1360例。患者选择卵子玻璃化冷冻是因为在ICSI当天丈夫取精困难。


入组及排除标准

•患者年龄：25-40岁

•BMI：17.7-33.9kg/m2

•患者存在已知的染色体异常以及男方精液浓度＜0.1百万/mL将被排除。


cRNA的制备

我们获得两枚患者捐献用于科研的正常卵子，一枚在冻融后进行ICSI受精，另一枚直接进行ICSI受精。为了实时可视化胚胎的分裂，用NdeI酶切pGEMHE-H2B-mCherry质粒，使之线性化。使用mMESSAGE mMACHINE™ T7 ULTRA 转录试剂盒 (Thermo Fisher）进行体外转录反应，然后利用MEGAclear™试剂盒(Thermo Fisher)进行RNA纯化。


图像获取及分析

经过ICSI的卵子，使用Leica TCS SP8 CARS共聚焦显微镜，在552-nm激发光下观察每个受精卵的第一次有丝分裂。每个胚胎每30分钟观察1次，至少12小时，从而获取受精卵第一次有丝分裂期间的形态学改变。


统计方法

连续型变量用均值±标准差及范围表示。选择1:1最近邻匹配方法PSM采样。Shapiro–Wilk检验确定数据分布是否正常，T检验与卡方检验用于评估差异是否有统计学意义。所有的统计分析均使用R语言处理。P < 0.05被认为具有统计显著性。


结果

共1360例患者被纳入研究（1293例新鲜卵子和67例玻璃化冻融卵子）。通过1:1PSM匹配其临床特征，我们分析了130例患者（65例新鲜卵子和65例玻璃化冻融卵子）。2例玻璃化冻融卵子组患者在新鲜卵子组无法找到匹配的样本，因此在分析过程中被排除。


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图1：在患者捐赠的新鲜受精卵中，染色体在第一次有丝分裂后被正常分配到两个细胞中。

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图2：在冻融卵子受精后可以观察到，染色体出现分离异常，从而导致的有丝分裂失败。

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讨论

在此项研究中，通过1:1PSM，观察到玻璃化冻融卵子与新鲜卵子相比，卵裂率、着床率、4细胞胚胎率和8细胞胚胎率均降低。第一次治疗尝试失败之后，接受再玻璃化冻融胚胎移植/FET的患者中，着床率和妊娠率在新鲜卵子组中更高。共聚焦显微镜分析记录到了玻璃化冷冻卵子染色体分离失败的情况。


我们并没有在玻璃化冻融卵子组中观察到分裂沟形成，这一复杂过程依赖于微丝的结构与数量等因素。由于我们研究中的显微图像显示了第一次有丝分裂期间的染色体分离异常，因此我们推测玻璃化冻融卵子对中心体和纺锤体的结构、微管蛋白和肌动蛋白有不利影响。但是，目前我们对玻璃化冻融卵子的影响知之甚少。


我们需要更多证据探究玻璃化冷冻技术是否对人类卵子造成影响。且需要优化实验流程，从而能够优化卵子玻璃化冷冻。


结论

临床数据和图像观察表明，卵子玻璃化冷冻对染色体分离有不利影响。胚胎发育异常可能与玻璃化对卵子纺锤体、肌动蛋白或微管蛋白造成的损害有关，但需要积累更多证据来证实。


致谢

我们非常感谢中国科学院的孙青原教授的支持并提供pGEMHE-H2B-mCherry质粒。


壁报摘要


P-51 培养时间对D5冻融囊胚妊娠结局的影响

作者：Junxia Liu、Guoning Huang


目的

探究培养时间对D5冻融囊胚妊娠结局的影响并优化囊胚移植策略。


方法

回顾性分析1576例移植周期第5日高质量玻璃化冻融囊胚，患者年龄均小于38岁 。根据冻融后培养时间，将样本分为2组，2-4小时（A组，n = 677）和16-20小时（B组，n = 899）。


结果

A组中着床率（64.58%），临床妊娠率（77.99%），持续妊娠率（71.79%）均高于B组（51.35%, 67.96%, 58.39%），差异具有统计显著性（P = 0.000）。A组中早期流产率（6.44%）显著低于B组（11.13%, P = 0.000）。


结论

D5冻融囊胚培养2-4小时妊娠结局更好。


P-67 第3天胚胎培养基中的GDF9是胚胎质量的有力预测因子

作者：Jing Yu Li、Guoning Huang


背景

已有研究表明卵泡液和卵丘颗粒细胞中生长分化因子9（GDF9）水平可作为预测胚胎质量的生物标志物。然而，第3天人类胚胎培养基中GDF9浓度是否与胚胎质量相关尚不清楚。


方法

研究纳入70对在第3天获得了至少4个胚胎（2个是可移植的，2个是不可移植的）的夫妇的280份培养基。使用酶联免疫吸附法（ELISA）测定GDF9蛋白的含量。


结果

培养基中GDF9浓度的AUC为0.785，敏感性为61.31%，特异性为83.11%，可作为预测移植胚胎的可靠诊断工具。随着胚胎质量的下降，培养基中GDF9浓度显著升高（胚胎质量良好:377±248 pg.ml-1，一般：655±464 pg.ml-1，差：1061±646 pg.ml-1，P<0.001）。


结论

培养基中GDF9浓度与胚胎质量有显著相关性。培养基中的GDF9有潜力成为非侵入性生物标记物，用于筛选胚胎。


P-476 卵丘细胞线粒体DNA拷贝数与预后良好的IVF患者的胚胎植入无关

作者：Weiwei Liu


研究问题

卵丘细胞（CCs）线粒体DNA（mtDNA）拷贝数能否作为预后良好的IVF患者胚胎植入潜力的生物标志物？


设计

这是一项对重庆市妇幼保健院生殖医学中心的预后良好的IVF患者进行的前瞻性队列研究。研究共收集了61个周期（包括31个植入周期和30个非植入周期）的392个胚胎，使用实时荧光定量PCR技术检测相应胚胎的CCs-mtDNA拷贝数，并对植入和非植入胚胎以及高质量和低质量胚胎的CCs-mtDNA拷贝数进行比较。随后对高质量和低质量胚胎的线粒体功能包括线粒体膜电位，ROS水平和相应卵丘细胞的ATP含量进行检测和比较，以验证前述比较的发现。


结果

同一人群中，植入胚胎和非植入胚胎的平均CCs-mtDNA拷贝数分别为255.61±81.02和254.50±73.29，高质量胚胎和低质量胚胎的平均CCs-mtDNA拷贝数分别为266.02±98.56和295.71±70.64。植入胚胎与非植入胚胎之间、高质量胚胎与低质量胚胎之间的CCs-mtDNA拷贝数没有差异。高质量胚胎与低质量胚胎之间的线粒体膜电位，ROS水平和相应卵丘细胞的ATP含量没有明显差异。


结论

在预后良好的IVF患者中，检测CCs-mtDNA拷贝数可能对胚胎优先级次序的决定没有任何帮助。CCs-mtDNA拷贝数与胚胎植入之间的联系需要进一步的验证。


P-777 利用下一代测序技术（NGS）分析胚胎植入前遗传学检测-非整倍体筛查(PGT-A)中不同活检方案对嵌合体比例的影响

作者：Shun Xiong、Jiang Wang、Jun Xia Liu、Wei Han、Jing Yu Li、Guoning Huang


目的

这项研究旨在分析不同活检方案对嵌合体囊胚发生率的影响。


方法

回顾性选取于重庆妇幼保健院行胚胎植入前遗传学检测-非整倍体筛查(PGT-A) 的115个活检周期共474例囊胚为研究对象。根据其活检方法分为两组：方法1组，对第3日胚胎行透明带（ZP）钻孔，于第5日或第6日行囊胚滋养层（TE）细胞活检；方法2组，于第5日或第6日行ZP钻孔，并于当日行TE细胞活检。


结果

方法1组的嵌合体比例为19.58%，显著高于方法2组（8.12%; P=0.000）。方法1组中整倍体比例略低于方法2组（47.50% vs. 55.13%; P=0.097）。逻辑回归分析表明活检方案的选择与嵌合体比例独立相关。两种方案的生存率和临床妊娠率没有显著差异。


结论

研究获得了不同活检方案影响嵌合体比例的证据。于第3日行ZP钻孔增加了嵌合体囊胚的发生率；而于第5日或第6日行ZP钻孔，嵌合体发生比例降低，且整倍体比例略高 。我们推荐使用后者进行活检。


P-872 一个ART周期胚胎移植后应用GnRH激动剂长方案和GnRH拮抗剂方案累计活产率比较：来自17842名中国女性的真实世界数据

作者：Jingwei Yang


提出问题

不同卵巢刺激方案（GnRH拮抗剂方案和GnRH激动剂长方案）是否会影响一个ART周期胚胎移植后的累计活产率？


研究内容

该研究中共有17842位初次接受IVF周期的女性，一次OPU后进行移植新鲜胚胎和冻融胚胎。GnRH 激动剂（GnRH-a）方案组和GnRH 拮抗剂（GnRH-ant）方案组的基线临床特征具有显著差异。一个完整ART周期后，GnRH-a方案组和GnRH-ant方案组移植胚胎的CLBR分别为10238/16028 (63.88%) 和779/1814 (42.94%)，(OR: 2.25; 95%CI: 2.13-2.59; P<0.001)。对年龄和获卵数进行分层分析及COX回归分析后，首次累积活产率在两方案的次优反应者中存在差异，GnRH-ant方案组CLBR低于GnRH-a方案组(P<0.001, 95%CI: 0.39-0.81(Tab1, Fig1)，但在其他卵巢反应人群中无统计学差异。


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Tab1


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Fig1


在40以下次优反应人群中，经新鲜胚胎移植周期后，GnRH-a方案组与GnRH-ant方案组相比，CLBR升高 (<35y: 68.57% vs. 54.23%; and 35-40y: 39.90% vs. 30.43%, all P<0.05).，但在其他反应人群中，累计活产率无统计学差异。


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在次优反应人群中，logistic回归校正相关协变量后显示，ET移植周期中，GnRH-a方案组活产率、累计活产率高于GnRH-ant方案组，FET移植周期结局无统计学差异。


结论

在不同的卵巢反应患者中进行方案优化和重新考虑GnRH-ant方案在中国的使用至关重要。


黄国宁教授

黄国宁教授，主任医师，硕士生导师。重庆市妇幼保健院副院长、生殖中心主任。现任中华医学会生殖医学分会主任委员，实验室学副组长，重庆市医学会生殖医学专业委员会主任委员；先后获得过卫生部中青年突出贡献专家，全国先进工作者，白求恩奖章等荣誉称号；享受国务院特殊津贴。专业方向：妇产科学、生殖医学，致力于生殖实验室的设计及规范化建设。


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DIP-CN-003193 2020/10/23