王记成，高鹏飞1，周琦，王秋实1，赵虎云1，张和平

(内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室，呼和浩特 010018

1内蒙古轻工科学研究所，呼和浩特 010050）

【摘要】目的研究益生菌双歧杆菌 V9 对便秘和腹泻患者的临床治疗效果，为该菌株的临床应用提供数据支持。方法以 153 例患有便秘或急慢性腹泻的患者为研究对象，对双歧杆菌 V9 菌粉进行为期 3 w 的临床试验验证，菌粉服用剂量为 1.0×1010cfu/d。试验期间，每 3 天记录一次受试患者的排便频率和粪便形态，并在试验前和试验后采集粪便，测定受试患者体内主要肠道菌群的变化。结果试验结果证明，连续 3 w 服用双歧杆菌 V9 菌粉，对便秘、急性腹泻和慢性腹泻患者的治疗有效率分别为 95.3%、95.4%和 89.9%，与试验前相比，患者粪便中双歧杆菌数量显著增加(P< 0.01)，肠杆菌、肠球菌、拟杆菌和产气荚膜杆菌的数量也发生了不同程度的变化(P<0.01)，接近健康人群肠道菌群结构。结论临床研究表明，双歧杆菌 V9 具有调节肠道菌群的作用，对便秘和急慢性腹泻患者治疗效果显著。[营养学报，2011，33（1）：70－74]

 

关键词：双歧杆菌 V9；便秘；腹泻；肠道菌群

中图分类号：R151 文献标识码：A 文章编号：0512-7955（2011）01-0070-05

 

THE CLINICAL STUDY ON THE EFFECT OFBIFIDOBACTERIUM ANIMALS V9 IN PATIENTS WITH CONSTIPATION AND DIARRHEA

 

WANG Ji-cheng , GAO Peng-fei 1,ZHOU Qi, WANG Qiu-shi 1, ZHAO Hu-yun 1,ZHANG He-ping

(Key Lab of Dairy Biotechnology andBioengineer, Ministry of Education, Inner Mongolia Agricultural University,Huhhot 010018;1Inner Mongolia Light Industrial Institute of Research，Huhhot 010050，China)

【Abstract】 Objectives To observe the therapeuticeffect of Bifidobacterium animalis V9 on patients with constipation anddiarrhea. Method One hundred fifty-three patients with constipation, acutediarrhea and chronic diarrhea were given B. animalis V9 freeze-dried powder for3 w and the dose was 1.0×1010cfu/d. The defecation frequencies and fecal propertiesof patients were recorded every three days and intestinal microflora wasevaluated before and after experiment.

Results The effective rates of B. animalisV9 on patients with constipation, acute diarrhea and chronic diarrhea were95.3%,95.4% and 89.9% respectively after po B. animalis V9 freeze-dried powderfor 3 w, The number of bifidobacteria in fecals increased (p<0.01)significantly compared with 3 w before, and colibacillus, enterococcus,bacteroid and clostridia also changed in different degree and closed to thehealthy men. Conclusion B. animalis V9 can regulate the intestinal microflora andhas communities, had remarkable cured effect on patients with constipation anddiarrhea. [ACTA NUTRIMENTA SINICA, 2011, 33(1)：70－74]

Key words：Bifidobacterium animalis V9; constipation；diarrhea; intestinal microflora

 

双歧杆菌 V9 (B.animalis V9)是自健康人体肠道中分离出来的一株益生菌，经 16S rDNA

鉴定为动物双歧杆菌乳亚种，与Bifidobac-terium animalis subsp. Lactic BB12 的同源性为 99%。B. animalisV9 具有良好的耐酸性、人工胃肠液耐受性及胆盐耐受性[1]，不携带耐药性质粒。研究结果表明，B. animalis V9 可以通过拮抗腹泻致病菌对腹泻小鼠进行有效治疗[2]，为了进一步验证 B. animalis V9 的功效，本试验以 153 例便秘和急慢性腹泻患者为试验对象，对B. animalis V9 进行为期 3 w 的临床试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象：于医院随机选择153名(10 岁以下 73 例、10～30 岁 35 例、30～55 岁 45 例)便秘和腹泻患者，完全符合伦理道德情况下，对自愿者进行治疗研究，其中便秘患者 43 例，腹泻患者 (包括慢性和急性腹泻)110 例。治疗期间患者未服用任何抗生素类药物，饮食与治疗前保持一致。

1.1.2 供试 B.animalis V9 菌粉：B. animalis V9菌粉由内蒙古自治区轻工科学研究所提供，成分组成为 B. animalis V9 活菌体、脱脂乳粉、乳糖（含量为 36.9%），其中 B.animalis V9 活菌体为 1.0×1011cfu/g。本菌粉已完成安全性试验。

1.1.3 仪器与试剂：组织捣碎仪；厌氧罐(BBL Gas park)；OLYMPUS BX50 型光学显微镜及 OLYMPUS PM-20 型摄像系统。

1.2 方法

1.2.1 供试 B. animalis V9 菌粉服用方法：将菌粉溶于温水或牛奶中，每次服用 0.1g，每日 1 次（1.0×1010cfu/d），饭后服,连续 21 d。

1.2.2 便秘与腹泻评价标准[3]：便秘和腹泻患者纳入标准参考肠易激综合症(IBS)罗马Ⅲ标准，腹泻病程短于 2w 为急性，超过 2 w 为慢性(表 1)。

 

1.2.3 排便频率和排便状态的记录：经统一培训的记录者（为课题参与者，最低学历为大学本科）每 3 d 咨询并记录患者排便频率和粪便形态，然后按下述公式计数出周排便频率，粪便形态的描述与表 1 相对应。

周排便频率(次/周)=3/7×排便次数（3 d 内）

1.2.4 肠道菌群的检测：分别于试验前后取患者粪便 2～5g，置于密闭厌氧罐中，冷藏条件下立即送实验室检测肠杆菌、肠球菌、拟杆菌、乳杆菌、双歧杆菌、产气荚膜杆菌的活菌数量。

取粪便 1g，加 PBS 缓冲液 9 ml 后，再加无菌玻璃珠充分振荡作为 1:10 的待检液，再做连续10 倍稀释(10-2～10-9)。取合适浓度的含菌液100 μl 涂布于适合肠杆菌、肠球菌、拟杆菌、乳杆菌、双歧杆菌、产气荚膜杆菌生长的选择性培养基，每个稀释度做 3 个平行。在需氧或厌氧条件下培养 48 h，选择菌落数在 30～300 间的培养基计数，并在计数前对细菌进行镜检鉴定，肠道菌群选择性培养基及其培养条件见表 2。

1.2.6 数据分析：采用 SAS 软件进行 ANOVA 分析

2 结果

2.1 便秘患者排便频率和粪便状态

试验期间，分别于 0、3、6、9、12、15、18、21d 时询问并记录 43 名便秘患者(其中 10 岁以下8 名；10～30 岁 21 名；30～55 岁 14 名)的排便频率和粪便形态。

图 1 显示，在服用 B. animalis V9 期间受试者平均排便频率均有显著变化(P＜0.01)，其中 8

名 0～10 岁便秘受试者在服用 D3 后排便频率明显增加，连续服用D9 后，平均排便频率已经达到每周正常指标 4～9 次，且粪便状态基本为表 1

所述健康人群粪便状态。21 名 10～30 岁组和 14名 30～55 岁组在服用 D6 后，平均排便频率有显著的增加，分别于 D12 和 D15 达到正常人群排便标准及粪便状态。

43 名不同程度、不同年龄的便秘患者连续服用 B.animalis V9 21d 后，未发现任何不适症状。

2.2 腹泻患者排便频率和粪便状态

试验期间，分别于 0、3、6、9、12、15、18、21d 询问并记录 110 名腹泻患者(其中 10 岁

以下 65 名；10～30 岁 14 名；30～55 岁 31 名)的排便频率和粪便形态。

由图 2 可看出在服用 B. animalis V9 期间，受试者排便频率均有显著变化(P＜0.01)。其中

65 名 0～10 岁腹泻者(其中急性占 81.5%、慢性占18.5%)在服用 D3 后排便频率明显降低，连续服用D12 后，平均排便频率达到每周正常指标 4～9 次，且粪便状态基本为表 1 所述健康人群粪便状态。14 名 10～30 岁腹泻者(其中急性占 21.4%、慢性占 78.6%)在服用 D3 后，平均排便频率有了较为显著的降低，于 D18 达到正常人群排便标准及粪便状态。31 名 30～55 岁腹泻者(其中急性占

16.1%、慢性占 83.9%)在服用 D6 后，平均排便频率有了较为显著的降低，于 D21 平均排便频率达到每周 10.63 次，接近正常人群排便标准。

110 名不同程度、不同年龄的急慢性腹泻患者连续 21d 服用 B.animalisV9 期间，未发现任何不适症状。

2.3 便秘腹泻患者在服用前后肠道菌群变化

便秘腹泻患者在服用 B. animalis V9 前和连续服用 21d 后，对粪便中双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌、拟杆菌、产气荚膜杆菌进行活菌计数，同时以健康人群(包括 5～8 岁儿童 3 名、15～25岁青年 3 名、40～50 岁中年 3 名)肠道菌群活菌数的平均值作为对照进行数据分析。

由表 3 可看出，便秘和急慢性腹泻患者肠道菌群数量与健康人群比有较大差异，最显著的是双歧杆菌数量明显低于健康人群。连续 21d 服用B.animalisV9 后(1.0×1010cfu/d)，便秘和急慢性腹泻患者肠道菌群结构有明显变化 (P＜0.01)。其中 43 例便秘患者肠道中双歧杆菌活菌数由服用前的 6.1lg cfu/g增加至 8.95lg cfu/g，肠杆菌数量显著(P＜0.01)升高，肠球菌、拟杆菌数量有不同程度的下降，产气荚膜杆菌数量未发生明显的变化。61 例急性腹泻患者肠道中的双歧杆菌活菌数由服用前 4.37lg cfu/g 增加至9.35 lg cfu/g，肠球菌、拟杆菌、产气荚膜杆菌数量均有不同程度的增加。49 例慢性腹泻患者肠道中的双歧杆菌活菌数由服用前的6.3 lg cfu/g 7 增加至 9.56 lg cfu/g，肠杆菌和肠球菌数量有不同程度的下降，拟杆菌数量增加，产气荚膜杆菌数量未发生明显变化。

 

2.4 便秘腹泻患者治疗结果（表 4）

 

由表 4 可以看出，连续 21d 服用 B. animalis V9 后，便秘和急慢性腹泻患者病情的有效率达到89.9%以上，其中对急性腹泻患者的治愈率达到83.6%，对便秘和慢性腹泻患者的治愈率分别为75.3%和 71.9%。

 

3 讨论

肠易激综合症(IBS)的病理生理学基础主要是胃肠动力学障碍和内脏感觉异常，而其变化机制尚不十分清楚。已有证据显示IBS患者存在肠道微生态环境改变。主要表现为对人体有益的双歧杆菌减少，而具有潜在致病作用的肠杆菌过度生长，导致双歧杆菌/肠杆菌(B／E)比例＜l，这意味微生物抗移植性＜l，易使潜在致病菌及外来致病菌过度生长产生便秘、腹泻等肠道功能失调症状[4-6]。益生菌可能通过以下机制缓解IBS患者的症状：（1）产生过氧化氢、有机酸及抗生素等化学物质，抵抗致病菌的定植和生长；（2）通过争夺营养维持肠道菌群数量和种类的平衡；（3）通过与肠黏膜上皮紧密结合形成生物膜，取消致病菌的吸附位置；（4）增强肠黏膜的免疫水平 [5,7-9]。

目前对便秘的治疗通常经口服乳果糖（lactulose）或聚乙二醇（polyethylene glycol, PEG）等通便剂进行治疗，但仅有 60%左右的病例可以治愈，因此需要使用一些更为有效的方法。

双歧杆菌、乳杆菌为代表的益生菌可产生乳酸、醋酸及其它有机酸来降低结肠pH 值，而较低的 pH 值可促进结肠蠕动，从而减少结肠转运的时间，这对于便秘的治疗是有意义的。很多有关益生菌缓解成人便秘方面的功效研究[10-11]证明当成人补给 B.animalis时，食物在结肠的转运时间减少[12]。益生菌 L.shirota和 B. infantis可增加成人便秘和 IBS 患者通便频率，且软化粪便 [12]。对儿童便秘患者的研究表明，L.rhamnose也可增加排便频率，并缓解腹痛[13]。

本研究表明，B. animalis V9 可以显著缓解并治疗便秘患者的症状，且无任何毒副作用，其治愈率高达75.3%。益生菌临床治疗胃肠道紊乱疾病的功效由于以下几个因素而变得复杂：不同的终点评估、益生菌菌株和剂量的变化等[14]。但是，本实验对于后期的功效评估是有意义的。所得结果充分证明该菌株对便秘患者的治疗功效。

目前对腹泻的治疗局限于维持疗法和对症疗法。严重症状通过口服补液疗法治疗。由于对病因的不了解或由病毒引起，抗生素治疗在 85%～95%病例中并不十分有效。通常引起腹泻的病因包含轮状病毒（ Rotavirus ）、沙门氏菌（Salmonella）、志贺氏杆菌（Shigella）、艰难梭菌（C. difficile）、内阿米巴属（Entamoeba）、腺病毒（Adenovirus），此外仍有 31%～48%的病因不能解释 [15]。

益生菌可以为急性腹泻提供有效治疗，尤其是对于那些由于胃肠道正常菌群紊乱引起的腹泻。正常菌群具备定殖抵抗力，这是一种抵抗致病菌侵入肠道并定殖的能力。一旦正常菌群被破坏，机体就变得易于被感染，而肠道正常菌群的恢复需要停止使用抗生素后 8 w。益生菌可以替代正常菌群，而对这种易感性具有独特的治疗功效。此时，益生菌可以通过产生抑菌素、修饰毒素、干涉致病菌附着、促进免疫系统等达到治疗目的。本研究中，益生菌 B. animalis V9 对急性腹泻和慢性腹泻患者的治愈率分别高达 83.6%和 71.9%，且无任何毒副作用发生，充分证明了该菌株对腹泻患者的治疗功效。

 

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