宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，其发生、发展是一个多基因调控的结果。Annexin A2是Annexins多基因家族中的成员之一，受Ca 2+调节并且被Ca 2+活化后，能结合到带负电荷的膜磷脂上，参与一系列与Ca 2+调节相关的膜性生物学活动。研究表明Annexin A2在肿瘤中异常表达，与细胞的增殖、凋亡有关，其蛋白表达异常与肿瘤浸润、转移或预后相关。Ki-67作为细胞增殖的重要指标可准确反映群体细胞的增殖活性，成为评价细胞生长分数的有效指标广泛应用于临床及基础研究。Annexin A2在宫颈癌中表达及其与Ki-67的相关性研究国内外少有报道。本研究通过检测宫颈癌中两者的表达，评估其临床意义。
 
    材料与方法
    1. 1 研究对象：
标本取自2005年1月至2007年1月间郑州大学第一附属医院妇产科宫颈活检及手术切除的病理标本113例，其中CINⅠ级8例，Ⅱ级7例，Ⅲ级9例，平均年龄38.83岁。宫颈癌74例，腺癌6例，全部经术后病理检查确诊。74例宫颈癌患者年龄25～70岁，平均48.76岁，病理分级：G1-G2级：44例，G3级：24例；根据国际妇产科联盟(FIGO)提出的分期标准进行临床分期：Ⅰa～1b：27例，Ⅱa期：23例，Ⅱb期及以上24例。另取15例正常宫颈上皮作为对照，为子宫肌瘤病例手术切除的正常宫颈组织。以上病理切片由有经验的病理科医生复核。
    1. 2 免疫组织化学方法：
采用SP法。鼠抗人Annexin A2(C-10): sc-28385多克隆抗体购自美国SANTA公司，鼠抗人Ki-67(ZM-0166)单克隆抗体、SP试剂盒均购自北京中杉金桥生物有限公司。操作按SP试剂盒说明书进行。实验步骤：标本常规石蜡包埋，4μm厚切片。石蜡切片脱蜡至水，PBS洗3次后，Annexin A2高压柠檬酸热修复，Ki-67加EDTA（乙二胺四乙酸）微波高温修复抗原，PBS冲洗3次。用3％H2O2以消除内源性过氧化物酶，10％正常山羊血清室温孵育15min，滴加适当比例稀释的一抗（鼠抗人Annexin A2抗体1:200，鼠抗人Ki-67抗体1:50）置湿盒内4℃过夜。滴加生物素标记的二抗，室温孵育20min，滴加三抗(辣根过氧化物酶标记链霉卵白素)，室温孵育20min，显色剂DAB（3，3-二氨基联苯胺四盐酸盐）显色,适时终止反应,苏木素复染，封片。PBS代替一抗作为阴性对照。
    1. 3 结果判定：
Annexin A2的阳性表达为棕黄色颗粒，位于细胞膜和胞质，以细胞膜为主。结果判定：采用双盲法在高倍视野下随机计数1 000个肿瘤细胞。在组织切片中显示胞浆或胞膜染为淡黄色或棕黄色为阳性细胞标志。根据肿瘤细胞的染色程度及染色细胞百分率进行分析评分：基本不着色为0分，着色淡者(浅黄色)为1分，着色适中者(棕黄色)为2分，着色深者(棕褐色)为3分；着色细胞占计数细胞百分率<5％为0分，5％～25％为1分，26％～49％为2分，≥50％为3分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分相乘为其最后得分。0～1分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～6分为中等阳性(++)，6分以上为强阳性(+++)。凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。Ki-67以肿瘤细胞核出现淡黄或棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞率10％为阳性。
    1. 4 统计学处理：
采用SPSS13.0统计软件处理实验数据，计数资料采用χ2检验和四格表确切概率法，等级资料采用spearman相关分析，显著水平α = 0.05。
 
    结果
    2．1 宫颈不同病变中Annexin A2蛋白的表达　
阳性反应以细胞膜为主(图1A)。Annexin A2在正常宫颈上皮、CIN和宫颈癌中的阳性表达率分别为13.3％、37.5％和71.6％，呈递增趋势。宫颈癌中阳性表达明显高于CIN及正常宫颈上皮组，与后二者相比差异有显著性(χ2值分别为9.93、19.01，P<0.05)。但正常宫颈上皮组与CIN组相比，差异无统计学意义(χ2=1.60，P>0.05) (表1)。
    2．2 宫颈不同病变中Ki-67蛋白的表达
Ki-67主要表达于正常的宫颈组织鳞状上皮基底层，中间层和表皮层几乎不表达。阳性表达见于细胞核(图1B)，呈棕黄或棕褐色，从正常宫颈上皮→CIN→宫颈癌，Ki-67表达亦逐渐增高，宫颈癌组与CIN和正常宫颈上皮组相比差异有显著意义(χ2值分别为17.93、16.96，P<0.05)，正常宫颈上皮组与CIN组相比，差异无统计学意义(χ2=0.49，P>0.05) (表1)。
    [JZ]     表1正常宫颈、CIN和浸润癌中Annexin A2、Ki-67的蛋白表达
    [BG(!]
    [BHDFG1*2，WK10，WK6，WK10。2W]项目[]例数[]Annexin A2表达率[] Ki-67阳性率
    [BHD]正常宫颈组织[]15[] 2 (13.3)[]        4 (26.7)            
    [BHDW]CIN[]   24[] 9 (37.5)[]       98 (37.5)             
    [BH]宫颈癌组织P[] 74[]54 (71.6*)[]      61 (82.4*)   
    [BG）F]   * P<0.05(vs正常宫颈；vsCIN)
    2．3 宫颈不同病变中Annexin A2、Ki-67的表达与临床病理特的关系
    Annexin A2的表达与年龄、组织类型、病理分级、淋巴结转移显著相关(P< 0.05)，与临床分期无明显相关性。Ki-67的表达与年龄、病理分级显著相关(P<0.05)，与组织类型、临床分期无明显相关性(P>0.05) (表2)。
    [JZ]表2 Annexin A2、Ki-67蛋白表达与临床病理特征的关系
    [BG(!]
    [BHDFG3，WK8，WK4，WK30W]类别[]总例数[][ZB（]
    [BHDG1*2，WK15。2W]Annexin A2阳性表达[]Ki-67阳性表达
    [BH，WK5。6W]n[]％[]P值[]n[]％[]P值[ZB）]
    [BHDG1*2，WK8，WK4，WK5。6W]年龄
    [BHDW]≤45 岁[]23[]12[]52.2[]15[]65.2
    [BH]> 45 岁[]51[]42[]82.4[]＜0.05[] 46[]90.2[]＜0.05
    [BH]组织类型
    [BH]CINⅠ[] 8[] 3[] 37.5[]3[] 37.5[]  
    [BH]CINⅡ[] 7[] 1[] 14.3[]2[] 33.3[] 
    [BH]CINⅢ[] 9[] 5[] 55.6[]＞0.05[] 4[]44.4[]＞0.05
    [BH]鳞癌[]  68[]53[]77.9[]55[]80.9[]
    [BH]腺癌[]  6[]  1[] 16.7[]＜0.05[]6[] 100[]＞0.05
    [BH]病理分级
    [BH]　G1-2[] 44[] 31[]70.5[] 32[]72.7[]      
    [BH]G3[]   24[] 23[]95.8[]﹤0.05[] 23[]95.8[]＜0.05     
    [BH]临床分期
    [BH]Ⅰa～Ⅰb[]27[] 20[] 74.1[]18[]66.7[]  
    [BH]　Ⅱa[]  23[] 19[]  82.6[]21[]91.3[]      
    [BH]Ⅱb及以上[]   24[] 15[] 62.5[]＞0.05[] 22[]91.7 [] ＞0.05
    [BH]淋巴结转移
    [BH]　有[]   13[] 13[]100[]  13[]100[] 
    [BH]　无[]   61[] 41[]67.2[]   ＜0.05[]  48[]78.7[]   ＞0.05
    [BG）F]
    2．4 宫颈不同病变中Annexin A2和Ki-67表达之间的关系
    相关分析结果表明：正常宫颈上皮、CIN和宫颈癌组织中Annexin A2和Ki-67的表达逐渐增高，宫颈癌中两者之间呈正相关，其相关性有统计学意义(r=0.359 , P<0.05) (表3)。
    [JZ]表3 宫颈癌中Annexin A2与Ki-67表达之间的关系
    [BG(!]
    [BHDFG3，WK10，WK20，WK10W]Annexin  A2[][ZB（]
    [BHDG1*2，WK20W]Ki-67
    [BH，WK10。2W]阳性[]阴性[ZB）][]P值
    [BHG1*2，WK10。4W]阳性[]45[]9
    [BHDW]阴性[]12[]8[]＜0.05
    [BG）F]
 
     讨论
    Annexin A2又名Annexin Ⅱ、ANXⅡ、LIP2、LPC2P36。最早是作为Rous肉瘤病毒转化基因的酪氨酸激酶底物被发现。人Annexin A2基因位于15q21，长40 kb，有13个外显子。
 
    Annexin A2是pp60vsrc、蛋白激酶C、表皮生长因子、血小板源性生长因子及胰岛素等一类酪氨酸激酶受体激活后磷酸化反应的底物，具有多种生理功能，如调节磷脂酶A2活性、细胞膜骨架联结、细胞增殖与分化、细胞分泌、胞膜物质运输<

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