子宫颈湿疣的病理变化与人乳头状瘤病毒的检测

Relationship between Histopathologic Observation of Cervical Condyloma and Human Papillomavirus Infection

　　YUAN Liyun, BIAN Meilu, LUO Jie, et al. China-Japan Friendship Hospital,
Beijing 100029

　　【Abstract】　Objective　To study the relationship between histopathologic changes of cervical condyloma and different subtypes human papillomavirus (HPV) infection. Methods　158 women with abnormal Pap smears diagnosed by computer assisted cytologic technique (CCT) including 71 cases with atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS), 65 cases with low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL), 17 cases with high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL) and 5 cases with squamous cancers, underwent directed biopsies under colposcopy and were simultaneously detected for HPV6/11, HPV16/18 DNA by polymerase chain reaction (PCR). Koilocytotisis in 73 cases with pathologically proven cervical condyloma were grouped into type Ⅰ and Ⅱ according to its atypical degree of nuclei. Results　HPV16/18 infection rate among condylomas cases was 86.0％, which was significantly higher than that of type Ⅰ (16.7％) (P<0.01). In LSIL with type Ⅱ koilocytotisis, HPV16/18 infection rate and abnormal mitotic figures (AMFs) occurrence were 85.7％, significantly higher than those in type Ⅰ koilocytotisis or cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ. Conclusions　Type Ⅱ koilocytotisis was correlated with HPV16/18 infection. LSIL with type Ⅱ koilocytotisises, distinct atypical nuclei, also associated with high HPV16/18 rate and AMFs, therefore treatment and follow-up should be more aggressive.
　　【Key words】　Cervix diseases　　Condylomata acuminata　　Papillomavirus, human

　　大量的流行病学研究显示，宫颈湿疣、癌前病变、宫颈癌三者密切相关。宫颈湿疣多表现为扁平湿疣，常伴宫颈上皮内瘤变(CIN)。随着分子生物学技术的发展，目前已经克隆了70余种人乳头状瘤病毒(HPV)亚型，其中高危型HPV与宫颈癌的发生、发展密切相关。若能从病理改变区别HPV感染亚型，对患者的临床处理具有重要意义。国外一些学者从病理表现的不同角度对此作了研究，结论不一^［1，2］。但尚未见从凹空细胞的异型程度来区别HPV感染亚型的研究。本研究从凹空细胞的异型程度分析73例宫颈湿疣的病理特点，与聚合酶链反应(PCR)技术检测HPV亚型进行对比，探讨宫颈湿疣病理改变与高危型HPV感染的关系。

资料和方法
　　一、研究对象
　　1996年9月至1998年2月，我院妇产科门诊行计算机辅助细胞检测(computer-assisted cytologic tech- nique, CCT)^［3］6 005例，结果异常的患者158例为本研究对象，包括71例不典型鳞状细胞(ASCUS)、65例低度鳞状上皮内病变(LSIL)、17例高度鳞状上皮内病变(HSIL)及5例鳞状细胞癌，年龄22～60岁，平均(33±9)岁。
　　二、方法
　　1.病理标本取材：对158名患者均在阴道镜下行宫颈多点活检。活检组织用10％甲醛固定，石蜡包埋、切片、HE染色。病理片由有经验的3位病理医生共同阅片，最后诊断。
　　2.病理诊断标准：宫颈鳞状上皮非典型增生及原位癌以Richart的CIN 3级为诊断标准。宫颈尖锐湿疣病理表现为：表层过度角化，棘层细胞及基底层细胞增生，表皮呈乳头状增生、伸长向表面突起，中表层见灶性凹空细胞。宫颈扁平湿疣表皮增生、平坦，中表层散在或成片分布凹空细胞。宫颈湿疣表中层凹空细胞的特点是：核周胞浆空泡化，细胞边缘尚留带状胞浆，核大、深染、核结构不清、核形不规则，常伴双核、多核^［4］。凹空细胞的核表现有两种形态。一种核增大，但不超过底层细胞核的1倍，核形不规则，染色深，结构不清，可见双核，偶见病理性核分裂相(AMFs)，即以放大400倍为高倍视野，病理性核分裂相1～2个/5高倍视野(HPFs)，该种凹空细胞我们称之为Ⅰ型凹空细胞；另一种核为底层细胞核的2～3倍，可见双核、多核、畸形核或巨核，有的核结构清晰、可见核仁，有的染色质浓聚呈团块状，结构不清，核膜增厚，不连续；核浆比例失调；常有病理性核分裂相1～6个/5 HPFs，我们称之为Ⅱ型凹空细胞。宫颈湿疣伴CIN的病理特点^［4］：CIN病变基础上表层及中层有HPV感染的特征性凹空细胞。
　　3.HPV-DNA的检测：采用PCR方法。取患者宫颈脱落细胞和分泌物进行常规DNA提取。PCR反应管购自中山医科大学科技开发公司，扩增按下列条件：变性94℃ 45秒→退火55℃ 45秒→延伸72℃ 60秒，共35个循环，最后置于72℃保温5分钟。取10 μl扩增产物，用8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳30分钟后，溴乙锭染色，紫外灯下观察照相。设PBR322/BSTN1作标记物，大小为438bp的扩增产物为HPV6/11阳性；294bp的扩增产物为HPV16/18阳性。HPV6/11引物1为5′-GTGGGGGAACCTGTGC- CTGA-3′，引物2为5′-TGTACCATTTGGGGGAGGCG-3′；HPV16/18引物1为5′-TGGTGCCATGGACTTTAC- TACA3′，引物2为5′-TCAGAGGTAACCATAGAGC- CAC-3′。
　　三、统计学方法
　　采用χ²检验。

结果
　　一、病理检查结果
　　158例中，73例为宫颈湿疣，其中单纯湿疣24例，宫颈湿疣伴CIN 49例，包括CINⅠ 15例、CINⅡ 20例、CINⅢ 14例。见表1。