支原体的检测与临床

北京大学第一医院妇产科 张岱
作者:admin 单位: 来源:中国妇产科在线 编者:
2013-8-20 阅读

  支原体属于柔膜体门,是一类在细胞形态和基因组方面比普通细菌小的细菌,直径0.2-0.3um,是目前已知的能自由生存的最小生物体,与女性生殖道感染性疾病相关的支原体主要包括解脲支原体、人型支原体、生殖支原体。利用培养、PCR等准确无误的检测手段检测支原体可以准确判断患者的状况,确定患者的疾病,判断支原体在其中的意义。

  1、解脲支原体(Uu)可在非淋菌性尿道炎、宫颈炎、盆腔炎、不孕不育、宫外孕、流产、胎停育、早产、新生儿呼吸道感染检出,性成熟无症状妇女40-80%下生殖道内有Uu,孕妇达80%。

  2、人型支原体(Mh)可在BV、盆腔炎等情况检出,性成熟妇女21-53%下生殖道内有Mh。

  3、生殖支原体(Mg)可在非淋菌性尿道炎、宫颈炎、盆腔炎、宫外孕检出,性成熟妇女0.7-6%下生殖道内有Mg。

  一、国内支原体检测的现状

  

    国内大多数医院采用液态试剂盒进行解脲支原体、人型支原体的检测并进行药敏试验,此种方法能够获得药敏试验结果,指导临床,且操作简便,对实验条件要求不高。但是人群阳性率高,与临床表现常常不相符,存在假阳性。少数医院采用核酸检测,敏感性高,可以分型,但是方法多样、成本高,不宜质控。

  1、培养

  取样应取尽可能多的细胞,避免用木质杆的棉拭子,1h内接种且保证不干燥,无需特别的运送培养基,-70℃冻存,37℃冻融,可以冻存后批量检测。

  Uu:液体培养基:变色因为尿素水解产氨导致pH值上升,酚红变色,琼脂平板培养:菌落直径15-30um,褐色颗粒状丛状菌落。

  Mh:水解精氨酸产氨导致pH值上升,酚红变色,菌落直径200-300um,脲酶阴性,油煎蛋样

  Mg:非常小的球形菌落

  支原体检测中液体培养基颜色变红,易出现假阳性,主要由细菌污染(标本中存在能分解尿素或精氨酸的细菌)及真菌污染(标本中有某些酵母菌污染,肉汤染色变化,但不浑浊,出现假阳性)所致,应依据固体培养基菌落形态确诊。

  2、非培养性检测

  非培养性检测包括显微镜检、血清学检查及核酸检测等。目前没有一个检测生殖器支原体的血清学方法已经标准化和商品化,因此血清学检查还不能推荐作常规诊断用。

  (1)显微镜检:显微镜检是指使用超高倍显微镜检直接对新鲜精液湿片进行支原体筛查,用此种方法进行支原体分型有一定困难,只能作为临床提供参考,而不能作为确诊一句,更不能作为治愈标准。

  (2)核酸检测

  核酸检测包括PCR法,巢式PCR法,荧光定量PCR法,反向斑点杂交、表面等离子体共振生物传感器快速检测、荧光偏振技术等。

  二、解脲支原体与微小脲原体

  解脲支原体分为14个血清型,其中1、3、6、14仅含17KDa(B群),其他型还包括16KDa(A群),微小脲原体是2001年Janet A Robertson提出的,将B群从原来的UU中分离出来作为一个新种。

  健康人群携带者无感染症状体征,培养法Uu(+),视为正常Uu携带者,不必治疗。Up更易于被携带,有条件者应进行Uu分型检测。

  在产科,无需常规对孕妇进行下生殖道Uu支原体的检测,早产、PPROM的孕妇可以取羊水进行Uu检测,在下生殖道发现Uu存在,不是用红霉素预防早产的指征。

  目前产科确定由解脲支原体导致的疾病包括尿道炎、早产/绒毛膜羊膜炎、早产儿的慢性肺部疾病。BV、宫颈炎可能由解脲支原体导致。

  三、生殖支原体

  Mg对培养基要求极高且生长缓慢,培养缓慢,尤其是林和粗昂标本中Mg的培养更不容易成功,采用组织细胞培养支原体,可为支原体提供良好的类似体内的生殖环境,根据Mg的免疫学特性,人们建立了用检测Mg抗体和检测与鉴定Mg抗原的血清学方法。

  DNA探针和聚合酶链反应(PCR)是研究Mg的最佳手段,生殖支原体黏附蛋白Pa基因、16SrRNA为靶基因设计的引物。

  Mg已经确定是尿道炎、宫颈炎的致病微生物,盆腔炎是否可由Mg导致目前尚未确定。

  四、人型支原体

  Mh是人类支原体中对生长条件要求最低的一种,大多数能在普通血琼脂平板上生长,形成非溶血性针尖大小菌落,Mh有7个血清型,但血清型的致病力差别尚不太清楚。目前确定由人型支原体导致的疾病包括产后发热/子宫内膜炎(产后发热患者血培养Mh阳性率较高)、绒毛膜羊膜炎/早产。BV、盆腔炎可能由人型支原体导致。

  五、盆腔炎

  盆腔炎患者多数是混合感染,治疗应覆盖需氧菌、厌氧菌以及支原体等非典型病原体,中国盆腔炎性疾病诊治草案中表明,盆腔炎最低诊断标准为宫颈举痛、子宫压痛或附件压痛。

  1、附加标准

  (1)体温超过38.3℃(口表);(2)宫颈或阴道异常粘液脓性分泌物;(3)阴道分泌物生理盐水涂片见到白细胞;(4)红细胞沉降率升高,C-反应蛋白升高;(5)实验室证实的宫颈淋病奈瑟菌或衣原体阳性。

  特异标准

  (1)子宫内膜活检证实子宫内膜炎;(2)阴道超声或核磁共振检查显示输卵管增粗,输卵管积液,伴或不伴有盆腔积液,输卵管卵巢肿块;(3)腹腔镜检查发现PID征象。

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