HPV病毒是小DNA的环状病毒,可以独立生存数月,具有独特的高选择性的感染病毒,亚型较多,其中与16型相关的HPV病毒中31、33、35与16型是同型别的,因此中国人群中,16、31、33、35亚型感染比较多。
   HPV感染要具备高危型、持续性感染、同一个型别、必须整合到细胞中这些条件,才会得宫颈癌。病毒感染正常宫颈后成为感染性的宫颈,发展为病变进而发展为宫颈癌。传播方式,不一定有性乱史,主要通过皮肤接触,会阴部接触是必要条件,不通过血液、唾液和精液传播,所以接吻不会传播。
   传统的阴道镜、细胞学、病毒、活检等三阶梯式检查,存在较多缺憾。如宫颈细胞学检查,灵敏度阴性预测值很低。HPV病毒检测阳性因为大多数可以自然消除,所以其阳性预测值偏低。阴道镜不能作为筛查技术,因其灵敏度和阴性预测值也较低。另外,医生阅片水平与对TBS系统的学习、个人主观因素等有很大关系。
   2009年诺贝尔奖获得者发现的人类第3号染色体上的TERC基因技术和HPV技术,已经应用于临床。端粒存在于X染色体短臂,长短与年龄有关,越年轻端粒越长。端粒酶可合成端粒。而在第3号染色体发现的TERC基因,可以使端粒增长,依据增长的长短,来判断增生能力。通过这个技术,可找到宫颈上皮细胞是否有异常增生的表现。如果有过度增殖存在,则说明有肿瘤,增殖严重提示有癌症存在。
   如何进行这方面的检查呢?可以通过荧光免疫杂交实验的办法,在显微镜下数点,要比学习TBS系统技术容易多。HPV感染以后,到细胞内与细胞合并、整合在一起,通过E2、E6、E7编码使蛋白质表达异常,在TERC基因的作用下就会扩增,疑似细胞凋亡,细胞如果不凋亡的话就会猛长,提示可能为肿瘤。通过免疫杂交实验,用一个探针标上荧光,与细胞上解链DNA结合,闪光则说明有TERC基因阳性的细胞,通过发亮的点来提示有多少细胞是有异常的。我们通过改良,应用在石蜡切片上来看扩增,来估计宫颈病变和宫颈癌在诊治分流中的作用。
   实验结果中,对照绿点和红点在镜下不同对应的比例,亮点越多,证明TERC基因越强,说明细胞增殖的也越严重。这样的检查方法不要求检测人员有很专业的TBS系统知识,一般的实验员就可以完成。病理结果病变级别越高,其DNA扩增阳性率也就越高。对于治疗中标本病理降级的情况,TERC基因扩增占65%,对病理升级的情况,TERC基因扩增占94%。由此可以见TERC基因有较好的敏感性。TERC基因相比较TCT、HPV、阴道镜的阳性预测值和阴性预测值都有一定程度的提升。这个检查在细胞间期、分裂中期、分化或没分化的、死亡或活的细胞,细胞学组织切片都可以检查到结果,并且可以在24小时内完成,重复性很好,人员培训很快,信号比较强,判断比较客观。
   石蜡切片的好处:1.标本保存比较好,保存时间比较长;2.检查定位比较准确;3.染色体破坏比较少;4.染色体荧光信号比较强,粗点放大比较亮,片子较好看。它可以协助进行三阶梯的筛查、分子分流,在诊断过程中确诊病变的时候可以指导CIN1-2的处理,预测宫颈病变的进展风险、治疗后的残留和复发。在临床中降低对ASCUS和LSIL的诊断率,明确的诊断出现病变是低级别还是高级别,这样在临床上就可以避免过度治疗或治疗不足。
   很多情况下,TERC基因的阴性或阳性,可以让医生在处理病人的时候游刃有余,避免找不到明确依据。在结果矛盾的时候,加上TERC基因的检查,医生的处理会更准确。因此推荐子宫病变、子宫颈病变、子宫颈癌的筛查方案在原有的三阶梯筛查基础上可以变为3+1或3+2。
   TERC基因检查特点可以总结为:1.取材方便、准确、避免污染;2.细胞稳定、处理成功率比较高;3.背景好,信号强。TERC基因是随着病变级别的越高,阳性率越高,与病变级别呈正相关,与HPV高危型感染呈正相关,灵敏度和特异度都较好,是值得推广的技术。它可以用于筛查分流、协助诊断、指导治疗、预测愈后。展望TERC基因以后能够应用到宫颈腺癌的诊断、妊娠期的宫颈癌筛查、病变治疗后的随诊、孵化型宫颈癌的诊断等这些方面。
   宫颈上皮细胞液基细胞DNA异倍体10年10万人次的宫颈癌筛查经验
   宫颈恶性细胞的病变过程,都是由病毒的DNA整合到细胞的DNA上去,也就是病毒的E6、E7干扰中心合成,纺锤丝缺陷出现异倍的细胞,异倍体的染色体细胞最后发展为晚期癌症。通过检查了解异常的细胞占的比例,来判断问题的大小,比较适合大面积的筛查。此种检查标本收集只需10分钟,NDA染色60分钟,然后扫描、诊断,不需要技术员过多去看,有问题的再进一步看。其敏感性和特异性是比较好的。
   DNA异倍体是查核内相对基因对的含量,通过摩根指数来看其异常着色,通过光密度来计算其光密度值,在同一个标本正常细胞做标准对照,通过直方图来找出恶性病变。它可以扫描每一个细胞。此种方法适合于基层,可以弥补基层缺少病理科医生的问题。自动DNA异倍体分析方法和常规细胞的比较,前者是属于分子水平,后者属于细胞水平。异倍体细胞在正常情况下只有8.3%,检查相对容易,病变级别越高,异倍体就会越多,检查更加敏感。与细胞变异程度、细胞病变异倍体数目都呈正比。
   另外,可以辅助ASCUS病人的检查和处理。ASCUS病人如果没有细胞异倍体,则没有病理检查在CIN以上病变者。如果存在细胞异倍体,那么有大部分病例是有CIN以上病变,这样就不会遗漏掉存在异常病变的病人。此种方法还可以用于包块的取材,涂片、膜片、液体甩片、残端刷片等,只要有足够的细胞就可以。对宫颈可以进行不同方式的检查,得到想要的结果。
   近一百年来,女性下生殖道感染临床检测逐步走向光电自动化的过程,由经验医学、传统细胞学走向可量化的诊断,以DNA定量的细胞学水平。医生需要加强学习,不断提高自己的知识能力,努力由经验细胞学走向询证细胞学。